Recibido: 18-09-2017 / Revisado: 12-11-2017
Aceptado: 25-12-2018/ Publ=
icado:
01-01-2018
Abstract.=
The
air pollution generated by the Urban Solid Waste (RSU) deposited in the
Sanitary Landfills of the Decentralized Autonomous Governments (GADS)
constitute a global environmental concern (Jiménez, 2012); the use of landf=
ills
as a waste disposal method is highly replicated. However, due to the
compilation of foods and allowed cells (Pagalilauan
et al., 2018) that are transported in the air. Exposure to these bioaerosol=
s is
associated with a wide range of infectious, toxic, acute, allergic and even
cancer diseases (Douwes et al., 2003). Due to t=
he
daily accumulation of MSW and its nature, the Porrón
Landfill of the city of Ríobamba results in a h=
igh
level of biological risk for workers and inhabitants of the sector.
Methods: The sampling of air was done during four =
weeks from Monday to Friday divided into two parts: the first in the area o=
f hospital waste and the second in the area of =
common waste. The air was aspirated with syringes of 20 cm3 and was deposit=
ed in the Brain-Heart Infusion culture broth, with 50 aspirations for each =
of the samples. These samples were incubated at 37 ° C for 48 hours to obta=
in optimal growth of the bacteria and then planted in two different culture=
media, being Triphena Soya Agar and MacConkey Agar. Finally, the b=
acterial species identified were associated with the risk groups mentioned =
by Royal Decree 664/1997
Results: We identified 103 morpholo=
gically different colonies from which we observed 12 different genera of ba=
cteria isolated from the culture media: Shigella, Enterococcus, Enterobacte=
r, Pantoea, Hafnia, Salmonella, Citrobacter, Staphylococ=
cus, Escherichia, Klebsiella, Proteus and Providence, of the 14 species 57%=
represent at the level of biological risk of group 2, 29% correspond to gr=
oup 3 and 14% are unidentified species.
Conclusion: Concentrations of colony forming units
were determined between 1.95x10 + 8 CFU / ml and 2.78x10 + 9 CFU / ml with =
the
presence of dangerous bacteria belonging to level 2 and 3 in terms of
biological risk and which gave higher concentration at a temperature of 16 =
° C,
relative humidity of 60%, organic matter of 55% present in the filling.
Keywords: Sanitary landfill, pathogenic bacteria, Environme=
ntal
contamination.
Resumen.
La
contaminación del aire generado por los Residuos Sólidos Urbanos (RSU) depo=
sitados
en los Rellenos Sanitarios de los Gobiernos Autónomos =
Desentralizados
(GADS) constituyen una preocupación ambiental de carácter mundial (Jimenez, 2012); el uso de
Rellenos Sanitarios como un método de eliminación de desechos es muy replic=
ado.
Sin embargo, debido a la compilaci=
ón de
desechos domésticos y clínicos estos permiten el crecimiento de especies
patógenas y baterías oportunistas (=
Pagalilauan et al., 2018) que se
transportan en el aire. La exposición a estos bioaeros=
oles
se asocian a una amplia gama de enfermedades infecciosas, tóxicas, agudas,
alergias y hasta cáncer (Douwes et al., 2003). Por la
acumulación diaria de RSU y por su naturaleza, el Relleno Sanitario de Porlón de la ciudad de Riobamba resulta con un potenc=
ial
alto de nivel de riesgo biológico para los trabajadores y habitantes del se=
ctor.=
Métodos: La toma de muestras de a=
ire se
realizó durante cuatro semanas de lunes a viernes distribuido en dos partes=
: la
primera en el área de desechos hospitalarios y la segunda en el área de
desechos comunes. El aire se aspiró con jeringuillas de 20 cm3 y=
se
depositó en el caldo de cultivo Infusión Cerebro-Corazón, con 50 aspiracion=
es
por cada una de las muestras. Estas muestras se incubaron a 37°C durante 48=
horas
para obtener un crecimiento óptimo de las bacterias para luego sembrar en d=
os
medios de cultivo diferentes, siendo Tripteína =
Soya
Agar y Agar MacConkey. Finalmente a las especies
bacterianas identificadas se asoció a los grupos de riesgo mencionado por el
Real Decreto 664/1997
Resultados: Se identificó 103
colonias morfológicamente diferentes de las cuales se observó 12 géneros
diferentes de bacterias aisladas de los medios de cultivos: Shigella, Enterococcus, Enterobacter, Pantoea, Hafnia, Salmonella, Citrobacter,
Staphylococcus=
,
Escherichia,
Klebsiella=
,
Proteus y Providencia, de las 14 especies el 57% representan a nivel de
riesgo biológico del grupo 2, el 29% corresponden al grupo 3y el 14% son
especies no identificadas.
CONCLUSIÓN: Se determinaron
concentraciones de unidades formadoras de colonias entre 1.95x10+8 UFC/m=
l y 2.78x10+9
UFC/ml con la presencia de bacteri=
as
peligrosas que pertenecen al nivel 2 y 3 en cuanto a riesgo biológico y que
dieron mayor concentración a una temperatura de 16°C, humedad relativa del =
60%,
materia orgánica de 55% presente en el relleno.
Palabras Claves=
:<=
span
style=3D'mso-bookmark:_Toc440896901'> Relleno sanitario, Bacterias
patógenas, contaminación ambiental.
Introducción.
En el Ecuador como en otros países
del mundo, la contaminación ambiental está asociada con la extracción y
transformación de los recursos naturales; además de otros factores
antropogénicos, como actividades industriales, comerciales, agropecuarias,
tráfico vehicular y residuos sólidos. Los esfuerzos para controlar la
contaminación del aire constituyen una preocupación ambiental de carácter
mundial; organismos internacionales como la OMS, OPS, a partir de los años =
1957
(OMS) y 1965 (OPS), vienen desarrollando programas de investigación, con el
objeto de colaborar con los gobiernos miembros en el desarrollo de políticas
adecuadas de control, a fin de reducir la contaminación del aire a través de
técnicas de control y manejo general de la calidad del aire <=
!--[if supportFields]> ADDIN EN.CITE
<EndNote><Cite><Author>Castro</Author><Year>2=
009</Year><RecNum>6</RecNum><DisplayText>(Castro,
2009)</DisplayText><record><rec-number>6</rec-number&g=
t;<foreign-keys><key
app=3D"EN"
db-id=3D"f0teptr265dr2aesdrqxdd9mszsewtxszext">6</key>&l=
t;/foreign-keys><ref-type
name=3D"Thesis">32</ref-type><contributors><aut=
hors><author>Castro,
C</author></authors></contributors><titles><titl=
e>Evaluación
aeromicológica en la calidad del aire de la zona aledaña al relleno sanitar=
io
Portillo Grande en el otoño del 2009</title></titles><volume=
>Tesis
de
postgrado</volume><dates><year>2009</year></date=
s><pub-location>Lima,
Perú</pub-location><publisher>Universidad Nacional Agraria La
Molina</publisher><urls><related-urls><url>http://w=
ww.lamolina.edu.pe/postgrado/cienciambientales/Tesis_Maestr%C3%ADa_Clara.%2=
0Summary.%20pdf.pdf</url></related-urls></urls></recor=
d></Cite></EndNote>=
(Castro, 2009).
Los aerosoles biológicos correspo=
nden
a partículas de tamaño microscópico suspendidas en el aire, bien de origen
natural o antropogénico que pueden afectar a los seres humanos, causándoles
algún tipo de alergia, toxicidad o infección =
(Pereira et al., 2009)
Los microorganismos se encuentran=
distribuidos
en el suelo, aire, agua, plantas y animales, siendo uno de los grupos más
abundantes en el ambiente.
Las aerobact=
erias
son microorganismos suspendidos en el aire, introducidos por fuentes natura=
les
y antropogénicas como: acción del viento y la lluvia, actividades agrícolas,
vertido de residuos comunes, etc. La mayoría de las ae=
robacterias
son patógenas para el ser humano, las cuales causan enfermedades o infeccio=
nes
dependiendo de la vía de exposición, dichas bacterias pueden ser grampositi=
vas
o gramnegativas =
(González y Campo, 2016=
).
Este trabajo tiene como objetivo determinar el nivel de riesgo biológico en=
el
aire del relleno sanitario del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal =
de
Riobamba (GADM Riobamba).
Materiales
y método.
Esta investigación se desarrolló
siguiendo el método aerobiológico propuesto por=
=
(Herrera et al., 2012)
y la norma =
(INEN, 2015<=
/a>).
Trabajo
de campo.
El relleno sanitario posee una
extensión de 4 hectáreas que consta de dos zonas: desechos hospitalarios y
desechos comunes. En las instalaciones del relleno sanitario se tomaron 40
muestras de aire, 2 muestreos por día durante 20 días, 10 días en la zona de
desechos hospitalarios y 10 días en la zona de desechos comunes, mismos que=
se
realizaron en puntos diferentes donde existe mayor probabilidad de
contaminación biológica procedente de los desechos.
Toma
de muestras.
Para el proceso de muestreo se
utilizaron trajes adecuados para el muestreo.
Para la toma de muestras de aire =
se
utilizaron jeringuillas de 20 cm3 estériles, sin aguja, por cada
toma de muestra y zona de estudio, se realizaron 50 aspiraciones de aire. E=
stas
aspiraciones se depositaron en matraces de vidrio que contenían caldo de
cultivo Infusión Cerebro-Corazón (BHI-Brain Hearth Infusion).
Los matraces fueron sellados y so=
lo
abiertos para depositar las muestras evitando que la jeringuilla tope el ca=
ldo
de cultivo. Cada 10 aspiraciones se agitó el matraz para que el medio tenga
interacción con el aire.
Estos matraces se transportaron,
almacenaron e incubaron a 37°C durante 48 horas permitiendo el crecimiento =
de
microorganismos fácilmente observables por la presencia de turbidez del cal=
do
de cultivo =
(Vargas, 2011).
Trabajo
de laboratorio.
Presencia
de bacterias.
Una vez transcurrido el tiempo de
incubación, se realizó el aislamiento bacteriano en una cámara de flujo lam=
inar
vertical, para lo cual se prepararon diluciones en caldo peptona al 1%; en =
Tripteína Soya Agar se hicieron diluciones 104,
105, 106, y para Agar MacConkey se hicieron dilucione=
s 101,
102, 103. Mediante el uso de una micropipeta y puntas
estériles se inoculó 100μl sobre Cajas Petri con medio sólido Tripteína Soya Agar y Agar MacConkey para cada día, z=
ona y
hora de muestreo, realizando difusión en placa con el asa Digralsky,
y se incubaron a 37°C durante 48 horas.
Al finalizar el tiempo de incubac=
ión
se evaluaron ambos medios de cultivo; para el Agar MacConkey la presencia de
bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa, dichas bacterias con
características macroscópicas diferentes fueron aisladas mediante estría si=
mple
con ayuda de una asa de punta redonda en cajas <=
span
class=3DSpellE>tri-petri, en el mismo medio de cultivo del que fueron
extraídas, posteriormente se llevó a incubación durante 48 horas a 37°C.
En el caso de Tripteína
Soya Agar se evaluó el crecimiento de microorganismos aerobios, anaerobios
facultativos y estrictos, para ello se utilizó cajas t=
ri-petri
con el mismo medio de cultivo del cual fueron extraídos dichos microorganis=
mos.
Se realizó el aislamiento mediante estría simple e incubó a 37°C por un per=
íodo
de 48 horas.
Al cabo de las 48 horas de incuba=
ción
del aislamiento bacteriano, se procedió a la verificación de posibles
contaminaciones, se realizó la purificación en caso de ser necesario y se
almacenó para su posterior empleo en las pruebas IMViC=
=
(Vargas, 2011).
Cantidad
de microorganismos (Turbidez).
El recuento de microorganismos
viables se efectuó mediante el método turbidimétrico,
con el que primeramente se elaboró una curva estándar denominada curva está=
ndar
de McFarland por medio de reacciones químicas que simulan el crecimiento
bacteriano en un medio líquido. Para la elaboración de la curva estándar de
McFarland se utilizó como estándares diferentes volúmenes de ácido sulfúric=
o al
1% y cloruro de bario al 1,175%. (Ver Tabla 1)
Mediante el espectrofotómetro DR =
5000
UV-Vis y tomando como blanco de medición el medio de cultivo BHI preparado y
estéril, se midió la turbiedad de los 40 muestreos aer=
obiológicos
realizados en el Relleno Sanitario del GADM de Riobamba y a una longitud de
onda de 600nm., obteniendo el número de unidades formadoras de colonias por
mililitro (UFC/ml).
Cuantificación
directa de UFC/ml.
Transcurrido el tiempo de incubac=
ión
de 48 horas de las muestras aerobiológicas se
prepararon diluciones seriadas al décimo en caldo peptona al 1%:=
- =
dil=
.(-1) 0,1 ml muestra + 0,9 ml sol=
ución
fisiológica.
- =
dil=
.(-2) 0,1 ml dil.(-1)
+ 0,9 ml solución fisiológica.
- =
dil=
.(-6) 0,1 ml dil.(-5)
+ 0,9 ml dilución fisiológica.
A continuación, se inoculó 0,1 ml
(100μl) de las diluciones -1, -2, -3 sobre Cajas Petri con medio sólido
Agar MacConkey y las diluciones -4, -5, -6 en Tripteín=
a
Soya Agar realizando difusión en placa con el asa Digr=
alsky.
Las placas fueron incubadas 48 horas a 37°C. Se contaron las colonias obten=
idas
en cada Caja Petri y de aquellas que tenían entre 30 y 300 colonias se
calcularon las unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml), segú=
n la
fórmula:
donde:
- =
UFC: unidades formadoras de colonias
- =
N: número promedio de colonias obtenidas para una dilución dada
- =
V: volumen inoculado
- =
FD: factor de dilución
=
(Universidad de Buenos Aires, =
2010).
Los microorganismos aislados fuer=
on
sometidos a pruebas bioquímicas para determinar su capacidad enzimática y p=
oder
identificarlas bibliográficamente como patógenas o no patógenas. Se emplear=
on 4
pruebas bioquímicas entre las que se encuentran: Indol, Rojo de Metilo,
Voges-Proskauer y Citrato de Simmons. Los resultados se representan como
positivos (+) o negativos (-) =
(INEN, 2015<=
/a>).
Se inoculó cada una de las bacter=
ias
aisladas con un asa de punta redonda en tubos de ensayo que contenían 5
mililitros de caldo de peptona al 1%, e incubó a 37°C durante 48 horas. Una=
vez
finalizado el período de incubación se añadió 3 gotas del reactivo de Kovac’s a cada tubo de ensayo, en la cual en caso de =
ser
una reacción positiva se forma un anillo en la superficie del medio de color
rojo oscuro (+) y en su defecto formación de color amarillo (-) =
(MacFaddin, 2003).
Se colocó 5 mililitros de medio de
cultivo líquido RM–VP (Rojo de Metilo y Voges-Proskauer) en tubos de ensayo,
donde se inoculó cada una de las bacterias aisladas y posteriormente se inc=
ubó
a 37°C durante 48 horas. Una vez finalizado el período de incubación se aña=
dió
3 gotas de solución de rojo de metilo al 0,2%, en la cual el caldo de culti=
vo
se torna de color rojo si es un resultado positivo (+), caso contrario el c=
aldo
se torna de color amarillo si es un resultado negativo (-) ADDIN EN.CITE
<EndNote><Cite><Author>INEN</Author><Year>201=
5</Year><RecNum>54</RecNum><DisplayText>(INEN,
2015)</DisplayText><record><rec-number>54</rec-number&=
gt;<foreign-keys><key
app=3D"EN"
db-id=3D"ppvw9dapgd0xsnevz925wzfbfrvazxsa2xdw">54</key>&=
lt;/foreign-keys><ref-type
name=3D"Government
Document">46</ref-type><contributors><authors><=
;author>INEN</author></authors></contributors><titl=
es><title><style
face=3D"normal" font=3D"default"
size=3D"100%">Control microbiológico de los alimentos. Detecci=
ón y
recuento de </style><style face=3D"italic"
font=3D"default" size=3D"100%">Escherichia coli</=
style><style
face=3D"normal" font=3D"default" size=3D"100%"=
;>
presuntiva por la técnica del número más
probable</style></title></titles><dates><year>=
;2015</year></dates><pub-location>Quito-Ecuador</pub-l=
ocation><publisher>Instituto
Ecuatoriano de Normalización</publisher><urls><related-urls&=
gt;<url>http://www.normalizacion.gob.ec/wp-content/uploads/downloads/=
2015/07/nte_inen_1529-8.pdf</url></related-urls></urls>&l=
t;/record></Cite></EndNote>=
(INEN, 2015<=
/a>).
Se utilizaron tubos de ensayo con=
5
mililitros de medio de cultivo líquido RM–VP, posteriormente se inoculó cada
una de las bacterias aisladas e incubó a 37°C durante 48 horas. Finalizado =
el
período de incubación se añadió 2 gotas de solución de hidróxido de potasio
(KOH) al 40% y 3 gotas de α-naftol al 6%, se agitaron y se dejó reposar
durante 5 minutos. Esta prueba se evaluó mediante la formación de una capa =
en
la superficie del medio de color rojizo, la cual se tomó como resultado
positivo (+) =
(INEN, 2015<=
/a>).
Para esta prueba se emplearon tub=
os
microbiológicos de tapa rosca en los cuales se esterilizó medio de cultivo
sólido Simmons Citrate y se dejó enfriar en pos=
ición
inclinada. Con un asa de punta redonda se realizó estrías de todas las
bacterias aisladas previamente y se incubaron durante 48 horas a 37°C. En c=
aso
de ser un resultado positivo (+) se evidencia el color azul de bromotimol e=
n el
medio =
(INEN, 2015<=
/a>).
Las bacterias aisladas fueron
transferidas a caldo TSA (Tripteína Soya Agar) =
que
contenía 15% de glicerol y se almacenó a -80°C.
Diseño
Experimental.
Según lo planificado en la
metodología del proceso, se realizó un diseño experimental del tipo AxBxC en el cual se consideró tres factores; factor A:
sectores de muestreo, factor B: horas de muestreo y factor C: días de muest=
reo.
La toma de muestras se realizó durante cuatro semanas de lunes a viernes
distribuido en dos partes: la primera parte para el área de desechos
hospitalarios y la segunda parte para el área de desechos comunes.
Resultados.
Crecimiento
microbiano.
Crecimiento
bacteriano.
El crecimiento bacteriano se
evidenció por el método de turbidez, el mismo que se identificó por el camb=
io
de coloración de ámbar brillante transparente a un color opaco turbio. Adem=
ás,
la formación de nata en la superficie del medio de cultivo, corroboró la
existencia de colonias bacterianas. Estos cambios en los medios de cultivo =
se
produjeron luego del periodo de incubación, mencionado en la metodología. <=
o:p>
El
método de turbidez es un estudio cuantitativo de concentración microbiana, =
para
el cual se requirió el empleo de la curva estándar de crecimiento microbian=
o,
conocida como escala de McFarland, la cual brindó los parámetros necesarios=
por
medio de reacciones químicas para conocer un valor estimado de microorganis=
mos
por métodos turbidimétricos y espectrofotométri=
cos.
<=
span
style=3D'mso-bookmark:_Toc515384187'>&nb=
sp;
<=
span
style=3D'mso-bookmark:_Toc515384187'>Difusión=
en
placa.
<=
span
style=3D'mso-bookmark:_Toc515384188'>Difusión=
en
placa para bacterias.
La siembra realizada de las 40
muestras (tratamientos) correspondientes al periodo de muestreo, fue realiz=
ado
por el método de difusión en placa en los medios de cultivo Agar MacConkey =
con
diluciones 101, 102, 103, donde el crecimi=
ento
fue minoritario y Tripteína Soya Agar con diluc=
iones
104, 105, 106, en el cual se evidenció un
crecimiento favorable.
En el medio de cultivo Agar MacCo=
nkey
se realizaron diluciones 101, 102, 103, pa=
ra
el área de desechos hospitalarios y desechos comunes, determinándose que en=
el
área de depósito de desechos comunes existió mayor concentración de
microrganismos y en el área de depósito de desechos hospitalarios no presen=
to
crecimiento. En este medio no hubo crecimiento en muestras provenientes del
área de desechos hospitalarios debido a que es un medio diferencial selecti=
vo
en el cual principalmente podemos encontrar Enterobacteriaceae y otros =
tipos
de bacilos gramnegativos, que presumiblemente son los tipos de microorganis=
mos
que se aislaron del área de desechos comunes =
(Bowen et al., 2014=
).
En el medio de cultivo Tripteína Soya Agar se realizaron diluciones 104=
,
105, 106, para el área de desechos hospitalarios y
desechos comunes, se evidenció que en la mayoría de las muestras hubo
crecimiento, esto debido a que el medio de cultivo no es selectivo, lo cual
favorece al desarrollo de microorganismos aerobios, anaerobios facultativos=
y
estrictos =
(Aravanlabs, 2017).
Se aislaron 103 colonias
macroscópicamente diferentes por medio de la técnica de estría simple, del
total de estas colonias 94 fueron asiladas en medio de cultivo Tripteína Soya Agar y 9 en medio de cultivo Agar MacC=
onkey.
Las colonias aisladas fueron codi=
ficadas
adecuadamente con el fin de facilitar su identificación en el proceso de
aislamiento. Cada colonia respectivamente codificada fue aislada en cajas <=
span
class=3DSpellE>tri-petri con el mismo medio de cultivo del que proce=
día,
lo que permitió que las funciones metabólicas de los microorganismos no fue=
ran
afectadas por el cambio de nutrientes presentes en el medio.
Se identificó que en la totalidad=
de
las cajas tri-petri con las colonias aisladas l=
uego
de las 48 horas de incubación hubo crecimiento bacteriano prolifero. Este
crecimiento de colonias bacterianas fue apto para su empleo en las posterio=
res
pruebas IMViC, detalladas en la metodología. Aq=
uellas
colonias que presentaron contaminación, fueron purificadas nuevamente hasta
obtener el resultado deseado.
Las pruebas =
IMViC
se realizaron a 103 bacterias macroscópicamente diferentes aisladas de las
muestras analizadas del aire de las zonas de desechos hospitalarios y desec=
hos
comunes del Relleno Sanitario del GADM de Riobamba.
Entre las pruebas realizadas
estuvieron la prueba de Indol, Rojo de Metilo, Voges Proskauer y Citrato de
Simmons. Dichas pruebas IMViC fueron de análisis
cualitativo, utilizando un criterio de resultados positivos (+) o negativos
(-).
Gráfico
1:
Repetitividad del aislamiento microbiano durante la fase experimental del
proyecto
|
|
|
Elaborado por: =
Grupo de Investigación.<=
/span>
|
En
el Gráfico 1, se puede observa=
r el
porcentaje de repetitividad de cada especie de microorganismo, a partir de =
las
103 bacterias aisladas. Los microrganismos con mayor presencia fueron Shigella flexneri =
/ Enterococcus faecalis=
con 35
repeticiones, lo que corresponde a un porcentaje de 33,98% del total de
bacterias aisladas. Las especies de microorganismos con el segundo porcenta=
je
más alto fueron Enterobacter cloacae Tipo
II, con 15,53% correspondiente a 16 repeticiones; seguido por Pantoea agglomerans
con 14,56%, equivalente a 15 repeticiones.
La
especie de Haf=
nia alvei
presentó una frecuencia de incidencia del 7,77%, correspondiente a 8
repeticiones; las especies de Salmo=
nella typhi / Citrobacter freundii y Staphylococcus <=
span
class=3DSpellE>aureus, con 7 repeticiones cada una, representaro=
n el
6,80% del total de bacterias aisladas respectivamente. La especie Escherichia coli =
presentó
el 5,83% el cual corresponde a 6 repeticiones; Klebsiella pneumoniae / Ente=
robacter
aerogenes representó el 4,85% con 5 repetic=
iones;
Proteus mirabi=
lis
con 2 repeticiones correspondiente al 1,94% de presencia bacteriana y
finalmente Cit=
robacter koseri /
Providencia con 0,97% y 1 repetición, siendo estas dos últimas especies=
los
porcentajes más bajos de repetitividad. Además, también un 0,97% del total,
correspondió a una bacteria que no se pudo identificar, a causa de que no se
encontró resultados estandarizados.
Cuantificación directa de UFC/ml.
Recuento en placa<=
span
style=3D'mso-bookmark:_Hlk533492348'>.
El recuento en placa fue utilizado
para determinar la concentración bacteriana de la muestra. El recuento de
microorganismos, se basó en el conteo de colonias visibles, en un rango de =
30 a
300 colonias. Sin embargo, la muestra no fue totalmente homogénea con respe=
cto
a su composición microbiológica, es decir, presentó muchos errores al defin=
ir
la concentración microbiana. Posterior al conteo de colonias visibles, se
consideró que la colonia estaba compuesta por unidades formadoras de colonia
(UFC) y se determinó la concentración microbiana aplicando la ecuación expu=
esta
en la metodología.
El paquete estadístico Infostat estudiantil, fue la herramienta de análisis
estadístico seleccionado para la investigación, con la finalidad de desarro=
llar
la prueba de Tukey con un diseño experimental del tipo AxBxC
a un nivel de confianza del 95% de los datos obtenidos de la medición por el
método de turbidez. En total se obtuvo 40 muestras, un coeficiente de
correlación del 77% y un coeficiente de variación del 37,52%, por lo tanto,=
los
resultados obtenidos entre muestras y réplicas no presentaron variabilidad
respecto a la zona de muestreo.
Discusión.
Los resultados muestran que la ma=
yor
variedad de microrganismos se presentó en el tratamiento a1b2c3, este
tratamiento correspondió al área de desechos hospitalarios del día miércole=
s a
las 15:00. Las bacterias que se identificaron bajo estas condiciones fueron=
: Enterobacter cloacae Tipo
II, Shigella flexneri<=
/i>, Enterococcus faecalis<=
/i>, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes=
, Proteus mirabilis=
,
Pantoea agglomerans, Salmonella typhi<=
/span>,
Citrobacter freundii<=
/i>. Sin
embargo, para el caso de desechos comunes el tratamiento que mayor variedad
presentó fue el tratamiento a2b2c3 del día miércoles a las 15:00. En este
tratamiento se evidenció el crecimiento de Shigella flexneri, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Hafnia alvei, Enterobacter cloacae Tipo II. Esto se debe a que
previo a la toma de muestras tanto los desechos hospitalarios como los dese=
chos
comunes fueron vertidos, lo que incremento la concentración de microorganis=
mos
del aire, lo cual causa un gran riesgo para el personal que se encuentra
expuesto.
Con la finalidad de determinar el
objetivo planteado del estudio, en el Gráfico
2 se observa los resultados de la interacción de los factores: factor A:
zonas de muestreo, factor B: horas de muestreo y factor C: días de muestreo=
en
relación al valor de las medias de concentración de unidades formadoras de
colonias por mililitro (UFC/ml) del medio de cultivo BHI mostraron que el
tratamiento a1b1c5, fue el tratamiento que mayor concentración y riesgo
biológico presento. Dicho tratamiento correspondió al muestreo realizado en=
la
zona de desechos hospitalarios, a las 10:00 am del día viernes. La concentr=
ación
alta de microorganismo en el aire puede ser el causante de posibles
enfermedades por exposición a los trabajadores del Relleno Sanitario del GA=
DM
de Riobamba.
Gráfico
2:
Concentración de microorganismos (UFC/ml) obtenidos por el método turbidimétrico de la combinación de los factores AxBxC.
Elaborado
por: Grupo
de Investigación.
Conclusiones.
· =
Por medio d=
el
estudio realizado se identificó que los microorganismos suspendidos en el a=
ire
del Relleno Sanitario del Gobierno Autónomo Descentralizado Municipal de
Riobamba (GADM Riobamba) en su mayoría son bacterias gramnegativas
pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae
(enterobacterias), identificando también bacterias grampositivas; de=
las
cuales algunas son de alta peligrosidad con niveles de riesgo de 2 y 3 segú=
n el
Real Decreto 664/1997; ocasionando enfermedades e infecciones al ser humano=
; estas
bacterias se desarrollan adecuadamente a temperaturas entre 25 y 40 °C por =
lo
que son microorganismos mesófilos.
· =
Se determin=
ó la
cantidad de unidades formadoras de colonia por mililitro de aire (UFC/ml) p=
or
medio de la turbidez con la utilización de una curva de calibración McFarla=
nd
cuyo coeficiente de determinación fue 99,35%, se encontraron concentraciones
entre 1,95E+08 UFC/ml y 2,78E+09 UFC/ml, dichas concentraciones no pueden s=
er
evaluadas bajo criterios debido a que no se ha establecido normativas en
nuestro país, estas concentraciones se dieron bajo las siguientes condicion=
es
temperatura de 16°C, humedad relativa del 60%, materia orgánica de 55% presente en el relleno.
<=
span
style=3D'mso-bookmark:_Hlk533492348'>
· =
Se comparó =
dos
métodos cuantitativos de determinación del crecimiento microbiano, un método
indirecto de turbidimetría que utiliza la curva estándar de McFarland por m=
edio
de las absorbancias para estimar la cantidad de UFC/ml presentes en el medi=
o,
el cual muestra la presencia de microorganismos vivos y muertos sin poder d=
istinguirlos;
y un método directo de recuento en placa que muestra la presencia de
microorganismos vivos permitiendo estimar las UFC/ml a través de una ecuaci=
ón.
· =
Para el
crecimiento de los microorganismos se utilizó dos medios de cultivo: Agar
MacConkey que permite el crecimiento de bacterias gramnegativas e inhibe
bacterias grampositivas debido a las sales biliares contenidas en el medio;=
y Tripteína Soya Agar (TSA) que es un medio no diferenc=
ial el
cual por sus nutrientes es utilizado para el crecimiento de todo tipo de
microorganismos.
·
Se identifi=
có la
presencia de 103 bacterias patógenas, y
por medio de las pruebas IMViC se determ=
inaron
que fueron grampositivas y gramnegativas; Shigella flexneri fue la bacteria que se ai=
sló
con mayor frecuencia en los medios de cultivo catalogada de alta peligrosid=
ad
por el Real Decreto 664/1997 con un nivel de riesgo de tipo 2, provocando
enfermedades en los trabajadores o personas expuestas a esta, con la posibi=
lidad
de tratamiento; la bacteria Shigella flexneri soporta temperaturas de 7 a 45°C, por lo=
que
es peligrosa para la salud humana ya que su crecimiento óptimo se a la
temperatura corporal.
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Signature=3DnOkpQyOCMebPFsltxoR1%2B7h9GQI%3D&response-content-dispositi=
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